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免疫组化实验试剂
PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L.
0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g.
0.5mol/L EDTA缓冲液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml.
1mol/L的TBS缓冲液(pH8.0):在800ml水中溶解121gTris碱,用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml.
酶消化液: a、0.1%胰蛋白酶液:用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液:用0.1N的HCl配制。
3%甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
封裱剂:
甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液(pH9.0~9.5)等量混合
油和TBS(或PBS)配制
TBS/PBS pH9.0~9.5,适用于荧光显微镜标本;pH7.0~7.4适合于光学显微镜标本
免疫组化实验操作流程:
脱蜡和水化
脱蜡前,应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后再浸泡10分钟;
无水乙醇中浸泡5分钟
95%乙醇中浸泡5分钟
70%乙醇中浸泡5分钟