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    研域生物公司: 研究牛血清是细胞培养的实验原理

    发布时间: 2017-08-16  点击次数: 1607次

    牛血清是细胞培养基中的中药成份之一。在培养基中加入适量血清(10%),首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、帖附因子等,其次它具有解毒作用,能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性;再次,它还能中止胰酶的作用,并?;は赴馐芑邓鹕说?。但是血清成分复杂,不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长作用的差异较大。血清的保存期只有一年,不同存放时期的血清的效力也不同。所以,当新购得的血清或要在开始一个重大试验的时候,应首先进行牛血清的筛选。 筛选时,通常选用正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞,也可以使正要准备培养的细胞。另外,用已知血清作对照。 

     

    仪器、材料和试剂 
    仪器 
    CO2 培养箱,超净工作台,微量加样器,灭菌锅 
    材料 
    96孔培养板,刻度吸管,移液管,试管,吸管,废液缸,血球计数板,HeLa细胞,Mel细胞 
    试剂 
    DMEM,不同批号的血清,胰酶,双抗 
     

    实验步骤 
    1.取HeLa细胞和Mel细胞(本来应该取正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞,但是实验室条件有限,本组做HeLa细胞),胰酶消化后,用无血清培养基(事先加双抗)吹打成细胞悬液(避免以前血清的干扰)。计数。 
    2.取4000个左右的HeLa细胞加入到每行的*孔(在加之前要震荡培养基)。本实验经计数后应加11μL细胞。 
    3.在A和H行中*孔加入89μL含标准血清(2004.12)的培养基。(对照组) 
    4.在A和H行中每一孔中加入100μL含标准血清的培养基。 
    5.将*孔中的液体吸100μL至第二孔,从第二孔吸100μL至第三孔,然后相同。zui后的100μL弃掉。这样就形成了从*个孔到zui后一个孔的细胞梯度从大约2056,1028等至1个。(要吹细均匀) 
    6.每个孔再补加100μL含标准血清的培养基。这可以保证孔中的营养物质。 
    7.在B行采取同样的方法。白介素ELISA试剂盒不同的是用含有需筛选的批号为011217血清代替标准血清。 
    8.在C至G行采用同样的方法。血清批号分别是030224,040528,040830,041012,041016。 
    9.将96孔培养板放入CO2 培养箱37℃培养一周。 
    10. 培养结束后,观察细胞生长的情况。比较在同一细胞浓度下的不同学清对细胞生长的影响。在同一细胞浓度下细胞生长数zui多的培养基所含有的血清即可作为被选择的血清样品。 

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