研域生物推出ELISA试剂盒代测：ELISA中常见问题及解决方法经验总结
elisa实验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的运用，但操作中的各个环节对实验的检测作用影响较大，如不留意，有可能导致显色不全、花板等成果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，进步实验质量。
下面分析Elisa实验操作中可能影响成果的原因，并给出相应的解决办法
1. 孵育
可能原因： ①孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*; ②孵育时刻人为延伸，导致非特异性结合紧附于反响孔周围，难以清洗*。
解决办法：①贴封片或加盖; ②按说明过程严厉控制操作时刻。
2. 洗板
可能原因：①选用手艺洗板,孔与孔之间液体穿插。②选用半自动洗板机洗板时，洗液量缺乏，导致洗板不*;洗板针阻塞，抽吸不*;洗板不畅，导致洗板作用差。③反响板过多形成洗板等候时刻长。
解决办法： ①确保洗液注满各孔，洗板针疏通，洗完板后在吸水纸(挑选洁净、无或少尘的吸水资料)上轻轻拍干; ②合理安排，或多用几台洗板机。
3. 显色
可能原因：①显色剂制造后放置时刻过长或运用过期显色剂; ②加显色剂时溅起孔外形成液体回流。
解决办法：①显色剂尽量在临用前制造，坚持不期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不必;②加样时保持显色剂不外流; ③A、B液应防止触摸金属器械。
4. 挑选试剂
挑选质量的检测试剂，严厉依照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
5 加样
可能原因：①血清或血浆标本别离欠好即进行加样;②手艺操作中，加样板过多形成加样后放入孵箱前等候时刻过长(特别是室内温度较高时);③加完标本再加酶试剂时酶溅起孔外。
解决办法：①标本为血清：将血液先天然寄存1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：有必要运用含抗凝剂的血液标本搜集管，采血后有必要当即倒置采血管混合5-10次，放置一段时刻后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要储存，则置于-20℃的低温冰箱内。② 加样后及时放入孵箱。③加酶试剂后用吸水纸在酶标板外表轻拭吸干。④如果选用AT或其他全自动加样，挑选FAME或其他后处理仪器加酶试剂。⑤标本较多时，请分批操作。
6. 停止
可能原因如加停止液时发生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加停止液时应防止发生气泡。
7. 读板
如读板时板底不清洁等。应确保酶标板清洁。
所以在整个操作过程中确保酶标板不触摸次氯酸;尽可能完成ELISA检测规范自动化，有效进步检测质量。
在实际操作中，除了挑选试剂外，有必要严厉依照操作过程进行操作，一起作好室内质控、室间质评，以谨慎的工作作风检测每一份标本，才干确保检测质量。现在国内已有适当数量的单位具有全自动酶标仪，这关于完成ELISA试剂盒规范化检测、进步检测质量起到了重要作用。