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    如何快速进行ELISA试剂盒酶免疫测定

    发布时间: 2017-12-26  点击次数: 1625次

    ELISA试剂盒由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,ELISA试剂盒均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原,因而免疫测定的使用规模极广,在临床查验中可用于测定:
    1) 体液中的各种蛋白质,包括含量很少的蛋白质如甲胎蛋白等。
    2) 激素,包括小分子量的甾体激素等。
    3) 抗生素和药物。
    4) 病原体抗原,HBsAg、HBeAg等。
    5) 另外,也可利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs等。
    5.符号的免疫测定
    ELISA试剂盒如上所述,免疫测定是一种很敏感的测定办法,抗原抗体反响后直接测定构成的沉积或浊度,敏感度可达5~10μg/ml,但在临床查验中,某些待测物在标本中的含量远低于这一水平,因而要寻觅增加敏感度的办法。符号的免疫测定是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以符号,经过测定符号物来进步敏感度。在放射免疫测定和中,ELISA试剂盒符号物分别为放射性核素和酶,zui后用测定放射性和酶生机来计算待检物的量,敏感度可比直接测定沉积物进步数百至数千倍。在符号免疫测定中,一般参加过量的符号试剂以确保与待测物*反响。以符号抗体(Ab ※)检测抗原(Ag)为例,反响式如下:
    Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※
    在反响产品中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※ ,如不将两者别离而测定符号物,测得的成果将为两者之和。因而,游离符号物与结合符号物的别离是符号免疫测定中的重要进程??刹捎枚嘀质侄?,固相载体是其中之一。如将抗原或抗体包被在固相载体上,然后再与符号的抗原或抗体直接反响,结合的符号物被固定在载体上,而游离的符号物留于溶液中。这样能够经过洗刷将游离的Ab※除掉,结合符号物的测定可在固相上进行。IgM抗体一般为?;ば钥固寰哂忻庖咝?。因而IgM抗体的测定,对某些流行症如甲型肝炎有较高的临床确诊价值。
    1.3 抗原抗体反响
    1.3.1 可逆性
    抗原与抗体结合构成抗原抗体复合物的进程是一种动态平衡,其反响式为:
    Ag+Ab→Ag·Ab
    抗体的亲和力(affinity)是抗原抗体间的固有结合力,能够用平衡常数K表明:
    K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]
    ELISA试剂盒高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上十分适合,两者结合结实,不易解离。解离后的抗原或抗体均能坚持原有的结构和活性,ELISA试剂盒因而可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗血清中,特异性的IgG抗体仅占总IgG中的极小部分。用亲和层析法提取的特异性抗体,称为亲和层析纯抗体,使用于免疫测定中可得到更好的效果。

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