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上海研域为您讲述：样品蛋白的提取和定量
发布时间： 2018-12-21 点击次数： 1642次上海研域今天为您讲述：样品蛋白的提取和定量
方法一：采取Tris-丙酮法进行蛋白提取，
方法如下：
（1）取0.5ɡ鲜叶放入用液氮预冷的研钵中，加入适量液氮后迅速将其磨成粉末。
（2）加入0.25ɡ水不溶性PVP，加入4倍鲜叶体积即2ml蛋白提取缓冲液 充分研磨。
（3）4℃下45min，后离心（4℃，15000g,15min）
（4）取上清液加入2.5倍即5ml -20℃预冷的丙酮，-20℃下静置45min，之后同上离心，取沉淀在-20℃下静置挥去丙酮。
（5）加入1ml上样液（12.5% ，0.5mol/L Tris-HCL PH6.8），沉淀充分溶解后，同上离心，取上清液即为待测蛋白溶液。
方法二：
取1～2g茶鲜叶加入等量PVPP和少量石英砂，液氮研磨，加入pH 7.4的PBS缓冲液继续研磨直至匀浆，15000 g、4℃离心15 min，上清液即为粗酶液。
粗酶液放于4℃冰箱中保存备用。蛋白定量采用G-250法（Bradford法）进行。
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