犬利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）酶联免疫分析ELISA试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。
 

犬利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）酶联免疫分析ELISA试剂盒

使用目的：
　　本试剂盒用于测定犬血清、血浆及相关液体样本中利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）表达。
 

犬利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）酶联免疫分析ELISA试剂盒

实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中犬利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中犬利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）的存在与否。
　　　试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 阳性对照 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 阴性对照 0.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算和结果判定：
　  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
　  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
　  阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）阴性
　  阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为利什曼原虫抗体（Leishmania spp Ab）阳性
　。
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
CB0054-50g Cerium （III） chloride, heptahydrate 氯化铈七水 [18618-55-8] 50g
C2139-25g Cerium （III） fluoride 氯化铈 [7758-88-5] 25g
CB0283-50g Cerium（III） nitrate, hexahydrate 硝酸铈 [10294-41-4] 50g
C2231-100g Cerium（IV） oxide 氧化铈 [1306-38-3] 100g
CB0051-50g Cerium（III） sulfate, octahydrate 硫酸铈八水 [13454-94-9] 50g
C2656-25g Cerium（IV） sulfate tetrahydrate 硫酸铈四水 [10294-42-5] 25g
C2694-5g Cesium bromide 溴化铯 [7787-69-1] 5g
C2777-5g Cesium carbonate 碳酸铯 [534-17-8] 5g
CDB0054-50g Cesium chloride 氯化铯 [7647-17-8] 50g
CDB0054-250g Cesium chloride 氯化铯 [7647-17-8] 250g