人瘦素ELISA 检测试剂盒　　　　　　　　　　　　

本试剂仅供研究使用  标本：血清或血浆

试验原理：
　　　　Leptin试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Leptin浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将Leptin和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Leptin的浓度呈比例关系。

自备材料
蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。

安全性
避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

人瘦素ELISA 检测试剂盒　

操作注意事项
试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法
血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

人瘦素ELISA 检测试剂盒　

操作步骤
使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能
1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

人瘦素ELISA 检测试剂盒　

结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的Leptin标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的Leptin含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-40nmol/L

4、敏感度： 0.1 nmol/L

Naphthalene-1,5-disulfonic acid tetrahydrate 1,5-萘二磺酸四水 [81-04-9] 50g
Naphthalene-1,5-disulfonic acid disodium salt 1,5-萘二磺酸二钠盐 [1655-29-4] 100g
Naphthalene-2,6-disulfonic acid disodium salt 2,6-萘二磺酸二钠盐 [1655-45-4] 100g
1-Naphthalene ethanol 1-萘乙醇 [773-99-9] 25g
2-Naphthalene ethanol 2-萘乙醇 [1485-07-0] 5g
1-Naphthalenesulfonic acid 1-萘磺酸 [85-47-2] 100g
1-Naphthoic acid 1-萘甲酸 （ alpha-萘甲酸） [86-55-5] 100g
2-Naphthoic acid 2-萘甲酸 [93-09-4] 25g
1-Naphthol 1-萘酚 [90-15-3] 100g
1-Naphthol 1-萘酚 [90-15-3] 500g
2-Naphthol 2-萘酚 [135-19-3] 100g
2-Naphthol 2-萘酚 [135-19-3] 500g
Naphthol AS acetate 色酚AS醋酸盐 [1163-67-3] 1g
Naphthol AS-BI phosphate 萘酚AS-BI磷酸盐 [1919-91-1] 250mg
Naphthol AS-MX phosphate 萘酚AS-MX磷酸酯 [1596-56-1] 500mg
Nile blue A 耐尔蓝A [3625-57-8] 25g
Nile Blue chloride 氯化尼罗兰 [2381-85-3] 25g
Nile red 尼罗红 [7385-67-3] 10g
Ninhydrin 茚三酮 [485-47-2] 100g
Nitrazine yellow 硝氮黄 [5423-07-4] 25g
Naphthol AS-MX phosphate 萘酚AS-MX磷酸酯 [1596-56-1] 1g
Naphthol AS-MX phosphate 萘酚AS-MX磷酸酯 [1596-56-1] 5g
Naphthol AS-MX phosphate disodium salt nonahydrate 萘酚AS-MX磷酸酯二钠盐九水 [36889-52-8] 250mg
2-Naphthol-3,6-disulfonic acid disodium salt 2-萘酚-3,6-二磺酸二钠 [135-51-3] 500g
2-Naphthol-6-sulfonic acid potassium salt 2-萘酚-6-磺酸钾 [833-66-9] 250g
β-Naphthoxyacetic acid β-萘氧乙酸 [120-23-0] 100g
β-Naphthoxyacetic acid β-萘氧乙酸 [120-23-0] 500g
β-Naphthoxyacetic acid sodium salt （a） β-萘氧乙酸钠 [10042-71-4] 100g
β-Naphthoxyacetic acid sodium salt （a） β-萘氧乙酸钠 [10042-71-4] 500g
1-Naphthylacetamide 1-萘乙酰胺 [86-86-2] 100g
1-Naphthylacetamide 1-萘乙酰胺 [86-86-2] 500g
1-Naphthyl acetate 乙酸-1-萘酯 [830-81-9] 5g
2-Naphthyl acetate 乙酸-2-萘酯 [1523-11-1] 5g
1-Naphthylamine 1-萘胺 [134-32-7] 25g
2-Naphthylamine 2-萘胺 [91-59-8] 10g
2-Naphthylamine 2-萘胺 [91-59-8] 25g
1-Naphthyl butyrate 1-丁酸萘基酯 [3121-70-8] 1g