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用人血清进行噬菌体ElISA
发布时间： 2011-10-15 点击次数： 2169次用人血清进行噬菌体ElISA
[器材和试剂]
● 包被缓冲液
● PBST
● PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％ BSA（Sigma）]
● 兔抗人Fc—特异性IgG（Pierce）：用包 被缓冲液稀释为5．0ug/ml①
● HRP标记的抗噬菌体抗体（Amersham Biosciences）：用封闭液以1/10000比例 稀释
● 显色液[3，3’，5，5’—四甲基联苯胺 （TMB）液体底物系统，Sigma]
[方法]
1．将200ul兔抗人Fc—特异性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育过夜。
2．用PBST洗涤多孔板。
3．加250ul PBBST。37℃孵育2小时。
4．弃去PBBST，将200ul噬菌体上清等量加入各孔。每孔中加入0．25ul血清，37℃振 荡孵育60分钟。
5，用PBST洗涤板孔。
6．加200gl HRP标记的羊抗噬菌体抗体。37℃振荡孵育30分钟。
7．用PBST洗涤板孔。
8．每孔中加200ul显色液。室温避光孵育15分钟。加25ul 2mol/L H2S04终止反应。分 析前在酶标仪中振荡10秒。
9．用自动酶标仪将A405和A655间的差值作为结果记录。
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