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ELISA试剂盒综合问题解答（三）
发布时间： 2014-06-09 点击次数： 1017次在做ELISA试剂盒实验过程中，难免会遇到各种不同的问题，下面是小编整理的实验条件选用：
如何选择合适的阳性对照？
阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致,一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质,加入一定量的待检物质.比如,以人血清为标本的测定,阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品.
如何选择合适的阴性对照？
阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致,先行检测确定其中不含待检物质.比如,检测人血清标本时,阴性对照应该选择正常人血清;检测免疫动物血清中抗体效价时,阴性对照应该选择该动物的免疫前血清.如何正确使用酶结合物？
1.酶结合物的稀释液
在稀释液中常加入高浓度的无关蛋白质(例如1%BSA或5%脱脂奶粉),通过竞争抑制酶结合物在固相载体上的非特异性吸附.一般还加入能够抑制蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂,如吐温20(0.05%的浓度较为适宜).2.正确稀释酶结合物
酶结合物的合适工作浓度需要通过预实验来确定,浓度过高易导致本底偏高,浓度过低则会导致阳性信号的减弱.
酶结合物在使用前稀释,稀释后的酶结合物不宜长期保存,因为低浓度的酶结合物极易失活.
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