大家在做ELISA试剂盒实验的过程中，难免会遇到各种不同的问题，比如标准曲线不好，试剂盒的回收率，假阴性，假阳性，实验的重复性不好等等。现在专业人士就来一一解答用户们在实验过程中遇到的各种疑问！
曲线问题： 
1.OD值不正常
试剂盒未回温，试剂盒回温到25℃
温度控制不好，控制正确温度
孵育时间不准确，控制孵育时间
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加，洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干
阳光直射，对着风直接吹，避风避
酶标仪的波长错误，酶标仪的波长450nm
抗体的稀释错误，正确的稀释抗体
水质问题，用娃哈哈矿泉水代替
2.白   板
洗涤液配制错误，正确的配制洗涤液
少加液体（错加液体），正确的步骤加液体
3.无 梯 度
标准品也污染，换标准品点板
OD值不正常，控制温度时间在做一次
人为点板，不要点板
4.线 性 不 好
OD值不正常，控制温度时间在做一次
回收率
1.空白管阳性高
样本本身就是阳性样本，换阴性样本做回收率
空白管在实验中被污染，实验中防止交叉污染
水质原因用，娃哈哈矿泉水代替
2.偏  高
添加量不准确，的添加量
添加浓度不适合，添加合适的浓度
取液吹干量多，准确的取液吹干
取到其它相层液体，取需用相吹干
复溶液未稀释或加入量少，正确的稀释复溶液
3.偏  低
添加量不准确，的添加量
添加浓度不适合，添加合适的浓度
取液吹干量少，准确的取液吹干
复溶液稀释错误或加入量多，正确的稀释复溶液
假阴、阳性
1，水质原因：点复溶液验证，用娃哈哈矿泉水代替
2，实验操作原因
吸取到其它相吹干，准确的取液吹干
离心不*，延长离心时间
样本的污染，更换样本
乳化未处理*，温浴（70℃）处理乳化现象
3，仪器试剂原因
离心管未清洗干净，正确的洗涤器具
有机溶剂的影响，做试剂空白看影响结果
4，衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）,更换衍生化试剂
5，与曲线好坏相关,，保证曲线的正常。