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    elisa试剂盒主要设备

    发布时间: 2014-12-19  点击次数: 1036次

    elisa试剂盒试剂
    (1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):
    Na2CO3 1.59克
    NaHCO3 2.93克
    加蒸馏水至1000ml
    (2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M
    KH2PO4 0.2克
    Na2HPO4·12H2O 2.9克
    NaCl 8.0克
    KCl 0.2克
    Tween-20 0.05% 0.5ml
    加蒸馏水至1000ml
    (3) 稀释液:
    牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
    加洗涤缓冲液至100ml
    或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。
    (4) 终止液(3M H2SO4):
    蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
    (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):
    0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
    0.1M柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml
    加蒸馏水50ml。
    (6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:
    TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml
    底物缓冲液(PH5.5) 10ml
    0.75%H2O2 32μl
    (7) ABTS使用液:
    ABTS 0.5mg
    底物缓冲液(PH5.5) 1ml
    3%H2O2 2μl
    (8) 抗原、抗体和酶标记抗体。
    (9) 正常人血清和阳性对照血清。
    器材
    (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。
    (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
    (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。
    elisa试剂盒试验原理
    试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
    自备材料
    1. 蒸馏水。
    2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
    3. 振荡器及磁力搅拌器等。
    elisa试剂盒安全性
    1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
    2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
    3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
    4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
    5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
    6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
    7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
    8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
    9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
    10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
    11. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
    12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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