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古人有云:学知不足,业精于勤。好的技术自有不朽的能力。科研之路是人走出来的,怎么走好这条路?学习是关键,在学习的道路上,只有历经过风雨和磨难的人,方能走向人生的。今天特整理一些相关ELISA技术教学文章,下面就让我们了解如何有效的学习ELISA实验技。
一,ELISA试剂盒在生物医学各领域的应用范围可概括四个方面:
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
二,ELISA试剂盒的基本原理有三条:
(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;
(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,ELISA法是一种既敏感又特异的方法。
四,ELISA试剂盒存在的问题
从以上的简单介绍中可以看出,ELISA法由于本身所具备的*性,是一项很有发展前途的实验性与血清学诊断方法,而且应用的领域也越来越广泛。但是我们认为ELISA不是万应良方,用它来代替一切,这是不当的。因为ELISA法还有局限性:
1、由于ELISA所用的抗原大部分还是混合的可溶性抗原,所以对同一微生物寄生虫或其他物质不同部位的抗原还没有分开。
2、内源性过氧化酶的普遍存在,如人脑组织中,呼吸道分泌物的炎症细胞中及某些病毒的组织培养中均有内源性过氧化物酶的活力,常不易除去,如果用某些方法除去时,则病毒的抗原性亦受到破坏,对于用ELISA检测不利。
3、对ELISA法的非特异性评价的资料尚不够完善,因此,对出现一些非特异性反应的时候,往往不易解释。
4、固相载体的质量常不统一,主要是原料及制备工艺还不一致,致使不同批号的固相载体有时本底值较高,有时吸附性能很差,影响试验结果。
5、试剂不统一,现在处于“八仙过海,各显神通”,标准还不能统一。
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